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熒光光度計的主要構成及基本原理

更新時間:2021-08-18      點擊次數:5563
  熒光光度計具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點,可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
 
  一、熒光光度計的構成:
 
  1. 光源:
 
  為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在300nm~400nm 范圍內強度幾乎相等,故較常用。
 
  2.激發(fā)單色器:
 
  置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
 
  3.發(fā)射單色器:
 
  置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
 
  4. 樣品室:
 
  通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。
 
  5. 檢測器:
 
  一般用光電管或光電倍增管作檢測器??蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D為電信號。
 
  二、熒光光度計的基本原理:
 
  由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質發(fā)出熒光,熒光經過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數字的形式顯示出來。
 
  物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產生熒光.
 
  不同物質由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
 
  在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
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